产品简介
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞及组织快速裂解液。RIPA裂解液有很多配方,按其裂解效果主要分为强,中,弱三种。RIPA强解液裂解组织、细胞得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western等对蛋白活性没有严格要求的实验。本产品主要成分包含50 mM Tris-HCl (pH 7.4),150 mM NaCl,1 mM EDTA-2Na,1% Triton X-100,1%脱氧胆酸钠及0.1% SDS。本产品适用于动物或植物组织及细胞样品,也可用于真菌或细菌样品。
储存与运输
冰袋(wet ice)运输;2-8℃避光保存,有效期18个月。
对于贴壁细胞样品:
1. 用PBS清洗细胞2-3次,最后一次彻底吸干残留液。
2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(强)于细胞培养板、瓶内,反复晃动培养板、瓶,使裂解液与细胞充分接触3-5 min。
3. 用细胞刮刀将细胞刮下,收集到离心管中。
4. 冰上裂解30 min。
5. 12000 g离心5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。
对于悬浮细胞样品:
1. 离心收集细胞。
2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例将细胞液与RIPA裂解液(强)混合,振荡。
3. 冰浴30 min,期间每10 min用移液器反复吹打数次,确保细胞完全裂解。
4. 12000 g离心5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。
对于细菌或真菌样本:
1.取1 mL菌悬液,离心去上清,PBS洗涤一次,充分去除液体。涡旋使菌体尽量分散。
2.加入100-200 μL RIPA裂解液(强),轻轻涡旋使菌体与裂解液充分混匀。
3.冰浴10 min,期间每2 min用移液器反复吹打数次,确保菌体完全裂解。
4.12000 g离心5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。