产品简介
本产品是新一代无蛋白快速封闭液，为多种聚合物的混合液，可快速填充固相支持物表面的空隙，减少非特异性信号的干扰；整体封闭效果明显优于传统的基于BSA（牛血清白蛋白）、脱脂奶粉、酪蛋白（Casein）等的封闭液；可用于Western Blot（WB）、ELISA、IHC、IF等实验中的封闭、一抗稀释。
快速高效：封闭时间5分钟即可，并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭剂相比，特异性信号更强。
背景低：本封闭液不含血清、白蛋白等蛋白质，确保了极高的信噪比。
兼容性好：本产品兼容辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶(AP)和生物素标记的二抗；不含影响HRP和AP活性的防腐剂；因不含生物素，故不会干扰基于生物素的检测。
使用便捷：本产品含TBST，可直接用于一抗的稀释。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，12个月有效，长期不用可-20℃保存。
组成
操作步骤
1. Western Blot中膜的封闭
a) 完成转膜后用TBST洗涤1-2分钟 ；
b) 根据膜的大小，选取合适的容器，加入一定体积的无蛋白快速封闭液，确保封闭液能完全覆盖膜，置于钟摆或水平摇床上封闭5分钟（若出现高背景见问题三，延长封闭时间）；
c) 使用无蛋白快速封闭液稀释一抗，稀释倍数参考对应一抗使用说明书，制成一抗工作液；
d) 封闭完成后倒出无蛋白封闭液，TBST清洗10秒，加入一抗工作液进行后续孵育。
注意：一抗工作液务必完全覆盖PVDF或NC膜表面；无蛋白快速封闭液的主要功能是封闭PVDF或NC膜上未被蛋白质结合的位点，从而降低背景，WB曝光结果条带增多可能说明抗体本身识别了非特异性条带，可换用其他封闭液（牛奶或BSA）；
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Western Blot常见问题参照表 |
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问题 |
可能原因 |
解决方法 |
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一、无信号 |
1) PVDF或NC膜上活性HRP较少 2) 一抗二抗种属来源不匹配 3) 一抗不识别目标抗原或者效价低 4) 转膜未成功 |
1) ECL二次孵育或延长ECL与膜的孵育时间 2) 换用超敏ECL曝光 3) 增加样本用量 4) 提高一抗浓度或换用效价高的一抗，设立阳性对照确保抗体可以识别抗原 5) 确定一抗种属来源选择与之匹配的二抗 6) 建议带蛋白marker电泳和转膜确保电泳和转膜正常进行 |
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二、信号快速衰减 |
1) ECL变质 2) PVDF或NC膜上活性HRP太多 |
1) 换用新批次的ECL
2) 降低样品用量 3) 降低一抗浓度 4) 降低二抗浓度 |
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三、高背景 |
1) 封闭剂与相关试剂发生交叉反应 2) 洗脱不彻底 3) 曝光时间太长 4) 封闭不充分 |
1) 换用无蛋白快速封闭液 2) 适当延长洗脱时间特别是0.22 µm PVDF膜 3) 缩短曝光时间或换用灵敏度更低的ECL 4) 延长封闭时间 |
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四、棕色/黄色条带或者条带反白（鬼带） |
1) PVDF或NC膜上活性HRP太多,被氧化失活的部分大量积累变成可见的棕色/黄色条带 |
1) 降低样品用量 2) 降低一抗浓度 3) 降低二抗浓度 |
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五、非特异性条带 |
1) 与抗体有关，一般单抗与多抗相比非特异性条带更少 2) 样本降解 |
1) 选择特异性好、效价高的抗体 2) 重新提取新鲜样本 |
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六、条带内存在不显影的白点 |
1) 转膜时滤纸与胶体、胶体与膜、膜与滤纸之间存在气泡 |
1) 转膜时务必将滤纸与胶体、胶体与膜、膜与滤纸之间的气泡排除干净 |
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七、条带变形 |
1) 制胶时胶体内部存在凝胶不均一的情况 2) 电泳时温度过高导致胶体变形 3) 转膜时温度过高导致胶体变形 4) 转膜时夹子过紧导致胶体挤压变形 |
1) 制胶保证凝胶均一性，特别是上层胶和下层胶界面处的平整度 2) 电泳时降低电压以降低产热或冰浴电泳 3) 转膜时需全程冰浴 4) 转膜时夹子不宜过紧也不宜过松，保证有一定压力即可 |
2. ELISA实验中基底的封闭
a) 使用抗原或抗体包被ELISA平板；
b) 每孔添加300 μL无蛋白快速封闭液，37℃孵育5分钟；
c) 按照ELISA实验要求，继续进行洗涤或甩板等后续步骤。
3. IHC和IF实验中的封闭
a) IHC和IF实验中使用本试剂作为溶剂溶解3%（质量体积比）的BSA，相较于PBS溶解的BSA，它在各组织中拥有稳定的封闭性能，优异的封闭效果；对于特异性好的抗体，可直接用本试剂作为封闭剂
b) 组织切片准备好之后加入无蛋白快速封闭液或者溶有BSA的无蛋白快速封闭液，室温静置30分钟（具有组织差异性）；一定要完全覆盖样本，避免样品干燥产生高背景
注意事项
1. 没有任何一种封闭剂能适用于所有抗原和抗体检测系统。如出现本试剂不适合的抗体，请替换使用其他类型的封闭剂如BSA或脱脂奶粉等。
2. 使用完毕后，将剩余溶液2-8℃保存，避免污染。
3. 本试剂具有一定黏度，移液枪吸取时需慢吸慢放以确保体积的准确性。
4. 本产品推荐仅使用一次，重复使用可能导致封闭效果下降；对于特异性好、信噪比高的抗体，本封闭液可以重复使用；回收的封闭液请勿与未使用过的封闭液混合使用。
5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并带一次性手套操作
6.产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
