产品描述
ATP是细胞内重要的能量分子,在细胞的各类生理生化活动中起着重要的作用,被称为生物体内能量货币。本试剂盒运用荧光素酶在ATP提供能量的情况下,催化荧光素产生荧光,且在一定范围内,荧光强度与ATP含量成正比的原理,可对样品间ATP进行有效检测。
储存与运输
干冰(wet ice)运输;-80℃避光保存,6个月有效;-20℃避光保存,建议3个月内使用。
试剂盒组成
操作步骤
1. 样品准备:
1.1. 组织样品:添加裂解液到组织(1:9比例,即0.1 g:0.9 mL)中进行匀浆裂解;匀浆5-10 min左右,并煮沸2 min;流水冷却后,4℃,10000 g离心10-15 min,取上清置于冰上待用;
1.2. 细胞样品:细胞收集后,使用裂解液重悬细胞(约每2×106个细胞加200-300 μL)匀浆5 min左右,并煮沸2 min;流水冷却后,4℃,10000 g离心10-15 min,取上清置于冰上待用;
2. 检测准备工作:
2.1. ATP检测标准品配制:根据需要,使用超纯水将ATP标准品(200 μM)进行梯度稀释(例如稀释至4/2/1/0.5/0.25/0.125 μM),与待测样品进行后续检测后,用于标准曲线法数据分析;
2.2. ATP检测工作液配制:将ATP检测酶试剂和ATP检测缓冲液按1:50配制成ATP检测工作液(根据实际组数配制,现配现用)
3. ATP检测:
参考下表进行ATP检测:
注意:为了实验数据的准确性,尽量避免添加不同样品间的时间过长。
4. 数据分析:
4.1.1. 根据梯度稀释的标准组值-空白组值数据使用Excel等软件绘制标准曲线:Y=a X+ b
注意:标准品的单位是μmol/L,后续计算用到的体积与质量单位分别是L与kg,kg/L=g/mL。
4.1.2. ATP含量计算:
Y为标准组值-空白组值;X为ATP含量;a为标准曲线斜率;b为标准曲线截距;ΔA为:样品组值-空白组值;V为匀浆裂解组织或细胞使用的裂解液的体积(L);m为组织湿重(kg);n为细胞量(106个);f为稀释倍数。
注意事项
1. 使用前充分溶解并轻轻晃动各类试剂,确保各成分均匀条件下使用。
2. 初次使用可视情况适当分装储存,以避免反复冻融影响试剂性能。
3. 标准品换算法分析数据时,需待测样品和标准品浓度处于试剂盒线性检测量程内;标准曲线法分析数据时,确保标准曲线R2>0.99。
4. 为了防止孔间干扰,推荐使用不透光白色孔板。亦可使用不透光黑色孔板,但是黑色会吸收荧光信号,降低检测的荧光信号。
5. 建议避光操作且检测时间尽量控制在短时间内,推荐使用排枪进行加样,并注意排枪各孔的吸液量是否一致。
6. 为了您的健康和安全,操作时请穿好实验服、戴好手套。
附录:技术参数
本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!