产品简介

​​

本试剂盒适用于新鲜血液样本中总RNA的提取。利用新型的离心吸附柱搭配独特的裂解试剂可以高效回收高纯度的血液总RNA，不需要苯酚、氯仿等试剂，仅需1 h，就能够快速地从小于1.5 mL的全血中提取总RNA，并有效地去除杂质蛋白。提取的RNA可直接用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern杂交、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等各种分子生物学实验。

储存与运输

​​

DNase，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其他试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。
 

使用前准备

​​

1. Buffer RL如有沉淀，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 操作前请向Buffer RL加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer RL加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer RL可在4℃放置一个月。

3. 使用前请向Buffer RW1加入18 mL无水乙醇，向Buffer RW2中加入72 mL的无水乙醇。

4. 使用前请用DEPC水配制70%的乙醇。

操作步骤

​​

1. 红细胞裂解液的稀释：使用Nuclease-free Water将10×Red cell Lysis Buffer稀释至1×备用（当血液样本量为200 µL时，则需要取140 µL 10×Red cell Lysis Buffer进行稀释）；

2. 取1体积的血液样本加入5体积的1×Red cell Lysis Buffer，混匀。如：当血液样本量为200 µL时，则需要加入1 mL 1×Red cell Lysis Buffer；

3. 置于冰上孵育15 min，期间上下颠倒混匀2-3次，当溶液变为半透明时，说明红细胞裂解完全。根据血液样本裂解的程度不同，可以将孵育时间延长至20 min；

4. 3,000 rpm，4℃离心10 min，将上清完全去除，请勿将白细胞沉淀吸出；

5. 向白细胞沉淀中加入2倍血液样本体积的1×Red cell Lysis Buffer（如：当血液样本量为200 µL时，则需要加入400 µL 1×Red cell Lysis Buffer），悬浮白细胞沉淀；

6. 3,000 rpm，4℃离心10 min，将上清完全去除，请勿将白细胞沉淀吸出；

7. 根据处理血液样本体积加入Buffer RL悬浮白细胞沉淀（使用前请确认已加入DTT Solution）。当血液样本量小于0.5 mL时，加入400 µL Buffer RL；当血液样本量为0.5-1.5 mL时，加入600 µL Buffer RL；

8. 将上述溶液转移至gDNA Eraser Spin Column中，12,000 rpm，室温离心2 min，弃掉gDNA Eraser Spin Column，收集滤液；

9. 向滤液中加入等体积70%乙醇（此时可能出现沉淀），使用移液器吹打混匀；

10. 将上述混合液（含沉淀）全部转移至RNA Spin Column，每次加入量不超过600 µL，如果超过600 µL可分批加入；

11. 12,000 rpm，室温离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column放回Collection Tube中；

12. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW1，12,000 rpm，室温离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column放回Collection Tube中；

13. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW2（请沿RNA Spin Column管壁加入Buffer RW2，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm，室温离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column放回Collection Tube中；

14. DNase消化（可选择）：

a） DNase反应液配制：取5 µL 10×DNase Buffer，5 µL DNase，40 µL Nuclease-free Water于Nuclease-free离心管中混匀；

b） 向RNA Spin Column中央加入50 μL DNase反应液，室温静置15 min；

c） 向RNA Spin Column中加入600 μL Buffer RW2，12,000 rpm，室温离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column放回Collection Tube中；

15. 重复步骤13；

16. 12,000 rpm，室温离心2 min，除去残留的液体；

17. 将RNA Spin Column置于一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，室温放置3-5 min，使RNA Spin Column残留的乙醇完全挥发；

18. 向RNA Spin Column的膜中央加入30-50 μL Nuclease-free Water，室温放置5 min，12,000 rpm，室温离心2 min洗脱RNA。若要得到更高浓度RNA，可将第一次的洗脱液重新加回RNA Spin Column中，室温静置5 min，12,000 rpm，室温离心2 min，再次收集RNA。

注意事项

​​

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 本试剂盒的最大样品处理量为1.5 mL（白细胞数量1×10⁷），如果血液中白细胞含量较高，可以按比例减少血液用量。

3. 本试剂盒适用于常规抗凝剂（包括肝素钠、EDTA、枸橼酸钠等）保存的血液RNA提取。

4. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用Nuclease-free的枪头、离心管。

5. 应使用RNA操作专用实验台与电泳设备。

6.产品仅供科研用途，不用于临床诊断！