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产品介绍

产品简介

本试剂盒适用于福尔马林固定、石蜡包埋组织（FFPE）的RNA提取，采用特殊的脱蜡试剂，不含二甲苯等有机溶剂，安全无毒，可有效地去除石蜡并释放出组织样本。本试剂盒利用特殊的裂解缓冲液能高效地裂解组织，结合离心柱法能快速有效地提取石蜡包埋组织的RNA，提取过程可在1 h内完成，RNA产量大，纯度和完整程度高，适用于RT-PCR和Real-Time PCR等下游分子生物学实验。

储存与运输

DNase和Proteinase K冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其它试剂室温运输，室温储存，有效期12个月。

使用前须知（请仔细阅读）

1. 提前准备80℃和55℃的水浴或加热块。

2. 如果Buffer CRL和Buffer FRB出现沉淀，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

3. DNase工作液现配现用。

4. 使用前请向Buffer RW2中加入64 mL的无水乙醇，混合均匀后使用。

操作步骤

1. 样本处理

I. 石蜡切片：取石蜡切片（5-10 μm厚，1×1 cm²大小）5-8张，若样本暴露于空气中，则表面的2-3张丢弃不用。

II. 石蜡块：用灭菌手术刀刮取约30 mg的组织样本，尽量去除多余的石蜡并切碎样本。

III. 福尔马林浸泡的样本组织：用滤纸吸干样本表面的液体，取约30 mg样本，切碎并置于1.5 mL离心管中，加入500 μL 1×PBS缓冲液（pH 7.4），涡旋振荡10 s后12,000 rpm室温离心1 min，弃上清，重复3次。

2. 将样本转移至1.5 mL离心管中，加入500 μL Buffer DP，80℃孵育3 min，趁热涡旋振荡10 s；

3. 向离心管中加入200 μL Buffer CRL，涡旋振荡混匀，12,000 rpm室温离心1 min，溶液形成上下两层（上层为油相，下层为水相）；

4. 于下层水相中加入20 μL Proteinase K，使用移液器轻轻吹打混匀（尽量不要破坏分层），55℃孵育15 min；

5. 随后将离心管转移至80℃孵育15 min（若只有一个加热模块，此步请将含样本的离心管先置于室温，当加热模块温度达到80℃后再将离心管放入加热模块中），上下颠倒混匀；

6. 12,000 rpm室温离心5 min，溶液形成上下两层（上层为油相，下层为水相）；

7. 取下层水相溶液至一新的Nuclease-free 1.5 mL离心管中（不要取到上层油相溶液和其他杂质），加入等水相体积的Buffer FRB和3倍水相体积的无水乙醇（可能会出现沉淀），使用移液器吹打混匀；

8. 将混合液全部转移至RNA Spin Column中，12,000 rpm室温离心2 min，弃滤液；

9. 配制DNase工作液：取35 μL Nuclease-free Water，5 μL 10×DNase Reaction Buffer和10 μL DNase于一新的Nuclease-free离心管中，使用移液器轻轻吹打混匀；

10. 将DNase工作液悬空滴加到RNA Spin Column的膜中央，室温静置15 min；

11. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW1，12,000 rpm室温离心1 min，弃滤液；

12. 向RNA Spin Column中加入600 μL Buffer RW2（请沿管壁加入Buffer RW2，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm室温离心1 min，弃滤液；

13. 重复步骤12；

14. 将RNA Spin Column置于收集管上，12,000 rpm室温离心2 min，取出RNA Spin Column置于一新的Nuclease-free1.5 mL离心管上；

15. 将RNA Spin Column开盖室温放置3-5 min，尽量使残留乙醇挥发完全；

16. 向RNA Spin Column的膜中央悬空加入50-100 μL Nuclease-free Water，室温静置5 min，12000 rpm离心2 min，收集RNA溶液。若要得到更高浓度的RNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至RNA Spin Column中，室温静置5 min，12000 rpm离心2 min，再次洗脱RNA。