产品简介

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本试剂盒通过特别优化的裂解缓冲液释放动物组织或培养细胞中的核酸，再通过专门为结合RNA设计的超顺磁性磁珠特异性地结合动物组织或培养细胞中的总RNA，经过漂洗去除磁珠表面残留的杂质，最后洗脱获得高纯度的RNA。本试剂盒无需苯酚、氯仿等有机试剂，磁吸时间短，操作简单，无需多步离心，可从5-20 mg的动物组织或新鲜培养细胞（106-107）中快速提取高纯度的RNA。提取的RNA可直接用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern杂交、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等各种分子生物学实验。

储存与运输

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Proteinase K，DNase，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

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使用前准备

​​ 1. Buffer RL如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。
2. 操作前请向Buffer RL加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer RL加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer RL可在4℃放置一个月。
3. 使用前请向Buffer RW1和Buffer RW2中加入指定量（见瓶身）的无水乙醇。
4. 按照提取样本量提前配制60%异丙醇（现配现用）。
5. 使用研磨仪研磨组织时，将研磨仪提前预冷。
6. 自备磁力架和1.5 mL RNase-free离心管。

操作步骤

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1. 样本裂解：
a. 动物组织：取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液（推荐G3019）保存的动物组织5-20 mg，置于装有2-3颗3 mm研磨珠（推荐G0203-150G）的1.5 mL RNase-free离心管或专用研磨管中，立即加入500 μL Buffer RL（使用前请确认已加入DTT Solution），使用组织研磨仪（推荐KZ-5F-3D）在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量），再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。
b. 悬浮培养细胞：将悬浮培养的细胞连同培养液一起倒入1.5 mL RNase-free离心管中，1,000 rpm离心5 min，收集悬浮培养的细胞（106-107），轻轻吸弃上清，向细胞沉淀中加入500 μL Buffer RL（使用前请确认已加入DTT Solution），用移液器反复吹打均匀至无明显沉淀，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。
c. 贴壁培养细胞：倒出培养液，用1×PBS（pH 7.4）清洗一次。向培养细胞中加入适量的Buffer RL（使用前请确认已加入DTT Solution）,水平放置培养皿，使裂解液均匀的分布在细胞表面并裂解细胞，然后使用移液器轻轻吹打，使细胞完全脱落，转移500 μL含有细胞的裂解液至不同的1.5 mL RNase-free离心管中，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。
2. 将上清转移至新的1.5 mL RNase-free离心管中，注意尽量不要吸取沉淀；
3. 向离心管中加入等体积的60%异丙醇（此时可能会出现沉淀），使用移液器吹打或涡旋振荡混匀，再加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需充分振荡至分散均匀），使用移液器吹打或涡旋振荡混匀；
4. 室温静置10 min，放置过程中，使用移液器吹打混匀数次，保持磁珠处于悬浮状态；
5. 将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；
6. 加入500 μL Buffer RW1，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；
7. 加入500 μL Buffer RW2，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；
8. 移去磁力架，进行DNase消化：
a）DNase工作液配制：取10 μL 10×DNase Buffer，10 μL DNase，80 μL Nuclease-free Water于新的1.5 mL RNase-free离心管中混匀；
b）向含有磁珠的离心管中加入100 μL DNase工作液，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温放置15 min，期间每5 min使用移液器混匀一次；
9. 消化结束后加入500 μL Buffer RW2，使用移液器吹打或涡旋振荡至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；
10. 重复步骤9；
11. 将离心管盖打开，室温放置5-10 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）；
12. 移去磁力架，向离心管中加入50-100 μL Nuclease-free Water，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温静置5 min；
13. 将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的1.5 mL RNase-free离心管中，即得高纯度的RNA。

注意事项

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1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻；磁珠易沉降，使用前应充分振荡使其保持均匀悬浮状态。

3. 向样本中加入磁珠前，需要将样本中的试剂混合均匀。

4. 洗脱RNA前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验。

5. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响RNA洗脱效率。

6. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用RNase-free的吸头和离心管避免交叉污染。

7.产品仅供科研用途，不用于临床诊断！